J0 - Le jour de la ponction ovocytaire

Les ovocytes : après la ponction, les liquides folliculaires sont apportés au laboratoire. Les ovocytes sont recherchés sous une loupe binoculaire. Ils sont ensuite transférés dans un tube ou une boîte de culture portant votre nom, contenant un milieu nutritif. Chaque ovocyte est placé dans un incubateur à 37° C et dans des conditions de culture optimales.
Les spermatozoïdes : le conjoint effectue son recueil de sperme par masturbation. Une abstinence sexuelle est recommandée pendant les trois jours précédant la ponction ovocytaire. Il est souhaitable de ne pas dépasser 4 jours d’abstinence. En pratique, on élimine le plasma séminal, et on sélectionne les spermatozoïdes les plus mobiles.

- Cas où une Fécondation In Vitro conventionnelle est réalisée
Chaque ovocyte est mis en présence d’un nombre suffisant de spermatozoïdes mobiles avant d’être replacé à 37 °C dans l’incubateur. La fécondation, qui débute par l’union d’un spermatozoïde avec l’ovocyte, s’achève en une journée par la réunion des chromosomes maternels ou paternels.

- Cas où une micro-injection intra-ovocytaire de spermatozoïdes est réalisée (ICSI)
Les ovocytes doivent être débarrassés des cellules qui les entourent (corona radiata). Pour cela, ils sont placés dans un milieu contenant des enzymes destinés à disperser ces cellules. C’est l’étape de « décoronisation », qui est ensuite parachevée, au moyen de pipettes très fines. A ce stade, on peut faire le tri entre les ovocytes matures et immatures.
Seuls les premiers sont fécondables et pourront être micro-injectés : pour cela, ils sont placés dans une boîte de culture, sous un microscope équipé de micromanipulateurs. Un spermatozoïde, qu’on choisit initialement mobile pour être sûr qu’il soit vivant, est micro-injecté dans chaque ovocyte.

J1 - Le 1er jour après la ponction : observation de la fécondation

Le lendemain de la ponction, on transfère les oeufs dans un nouveau milieu nutritif dépourvu de spermatozoïdes. A ce stade, on regarde au microscope si la fécondation a eu lieu ou non. S’il y a eu fécondation, on peut voir le noyau mâle, issu du spermatozoïde, et le noyau femelle, issu de l’ovocyte, au centre de l’oeuf : c’est le stade des « 2 pronuclei », encore appelé « zygote ». En fait, ce n’est que 24 heures plus tard qu’on sera certain de l’obtention ou non d’embryons, car à ce stade, l’oeuf aura subi un ou plusieurs clivages (divisions), et apparaîtra constitué de 2 à 4 cellules (4 en général).

J2 - Le 2e jour après la ponction : observation des embryons

Environ 48 heures après le prélèvement ovocytaire, deux éventualités se présentent :

- Il n’y a pas eu de fécondation (aucun oeuf ne s’est divisé) :
il faudra voir avec l’ensemble de l’équipe clinique et biologique si la cause de l’échec peut être déterminée.

- Un ou plusieurs embryons ont été obtenus :
un transfert embryonnaire est alors possible.
Les embryons sont observés au microscope. Ils peuvent être constitués de 2 à 6 cellules. Le stade à 4 cellules est le plus fréquent.
Vous serez personnellement informé(e) du résultat au laboratoire. Le transfert du ou des embryons est un acte simple, non douloureux, dénué de risque et le plus souvent pratiqué dans le laboratoire ou à proximité. Le ou les embryons sont introduits dans un tube fin (cathéter) en plastique, puis déposé(s) dans la cavité utérine après passage du col. En moyenne, seulement la moitié des ovocytes inséminés in vitro ou micro-injectés deviennent des embryons.
Les chances de succès augmentent avec le nombre d’embryons transférés mais le risque de grossesse multiple augmente simultanément.
C’est pourquoi, le plus souvent, 2 ou 3 embryons sont transférés, mais pas plus. Les embryons non transférés pourront avec votre accord, être congelés si leur aspect le permet : en pratique, certains embryons présentent des petits fragments ou bien les cellules qui les composent sont très irrégulières.
Ces embryons ont peu de chances de résister à la congélation, surtout si le degré de fragmentation est important. Il ne faut donc pas s’étonner si tous les embryons restants, dits « surnuméraires », ne peuvent être congelés.

Remarque : actuellement certaines équipes préfèrent transférer les embryons au 3e jour après la ponction (J3) :ils sont alors normalement constitués de 6 à 8 cellules.